TLC - Tyndtlagschromatografi - Bestemmelse af Aminosyre

Formål

Bestemmelse af ukendt aminosyre ud fra TLC (tyndtlagscromatografi) samt titrering.

Teori

Beskrivelse af aminosyre: En aminosyre består af en carboxylsyregruppe og en aminogruppe. Aminogruppen indeholder kvælstof (nitrogen) og er en funktionelgruppe ligesom carboxylsyregruppen er funktionel. Derfor er aminosyren et såkaldt difunktionelt stof. Idet aminer indeholder et kvælstofatom, er disse svage baser – begrundelsen herfor ligger i, at nitrogen ligger i femte hovedgruppe i det periodiske system. Dette gør, at der er ”3 frie pladser” i yderste elektron skal – dvs. 3 andre atomer kan binde sig hertil. Derudover gælder det også, at det frie elektronpar til højre, gør aminerne meget ivrige efter at optage hydroner – et kendetegn for svage baser. Således gælder det at den generelle formel for en 2-aminosyre ser ud: I dette eksperiment har vi benyttet følgende aminosyrer: - Gly (glycin): - Val (valin): - Cys (cystein): - Asp (asparagin) for hvilke deres pK -værdier er blevet slået op. I tabellen nedenfor ses disse samt bestemmelsen af hvorvidt stoffet er polært eller upolært. pK -værdiernes relevans skal ses på baggrund af titreringen, men hvordan polariteten præcist har relevans forklares i forbindelse med beskrivelsen STX 2.g Aminosyre pK pK Polaritet Gly mindre polær end Asp, mere end Val Val Upolær Cys Polær Asp Mindre polær end Cys, mere end Gly Første del af identifikationen af den ukendte aminosyre foregår ved et eksperiment, hvor tyndtlagschromatografi benyttes.

Tyndtlagschromatografi, forkortet TLC kan eksempelvis bruges til at undersøge hvor mange komponenter, der er i en bestemt opløsning eller – som i dette forsøg – bestemme identiteten af forskellige stoffer.

Når denne metode bruges, udnytter man stoffers polaritet. Når man i sin analyse bruger chromatografi, består dette af to faser, en stationær og en mobil fase. I dette forsøg er TLC den stationære fase, mens løbevæsken er den mobile. TLC-pladen er belagt med cellulose, som er et meget polært stof. Løbevæsken, derimod, er ikke så polær. Den består af en blanding af butan-1ol, ethansyre og deminiraliseret vand. De upolære aminer vil derfor følge den upolære løbevæske op ad pladen, når væsken bliver absorberet i pladen. De polære stoffer derimod binder sig hurtigt til den ligeledes polære TLC-plade.

Den ukendte aminosyre, vil følge én af de førnævnte aminers spor, og med sammenligning, vil det være muligt at få en startidentifikation på hvilken aminosyre, der er den ukendte. Ud over TLC-analyse, bliver den ukendte aminosyre titreret. Ved dette forsøg titreres aminosyren med NaOH.